Выпускницы Передовой инженерной школы «ФармИнжиниринг» Алина Хайруллова и Юлия Шевалдова — авторы перспективной разработки, открывающей новые возможности для экспресс‑диагностики инфекций. Их работа посвящена получению рекомбинантной BST-полимеразы. Метод позволяет выявлять ДНК возбудителей инфекций за 30–60 минут при постоянной температуре без термоциклера. Такая особенность делает его особенно удобным для быстрой диагностики и работы лабораторий в разных условиях.
Чтобы не зависеть от коммерческих поставок фермента, девушки разработали собственную генетическую конструкцию. В ходе проекта они прошли полный цикл исследований: начали с биоинформатического анализа гена и определения границ целевого фрагмента, затем спроектировали и синтезировали праймеры. Методом ПЦР был амплифицирован нужный участок ДНК, после чего его клонировали в экспрессионный вектор — так появилась рекомбинантная плазмида BSTpol. Далее последовали трансформация клеток E. coli и отбор положительных клонов, наличие вставки подтвердили рестрикционным анализом.
Следующими критически важными этапами стали экспрессия и очистка белка: именно они превращают генетическую конструкцию в рабочий препарат фермента. Сначала клетки E. coli заставили синтезировать целевой белок, а затем его выделили из клеточной массы и очистили от посторонних примесей.
В результате удалось получить препарат BST‑полимеразы, полностью пригодный для проведения LAMP‑реакций. Теперь лаборатория может самостоятельно нарабатывать этот фермент, строго контролировать его качество и при необходимости адаптировать или модифицировать под конкретные задачи. Собственная наработка фермента снизит зависимость от внешних поставок, а возможность доработки белка позволят точнее подстраивать методики под текущие исследовательские и диагностические цели.
Чтобы не зависеть от коммерческих поставок фермента, девушки разработали собственную генетическую конструкцию. В ходе проекта они прошли полный цикл исследований: начали с биоинформатического анализа гена и определения границ целевого фрагмента, затем спроектировали и синтезировали праймеры. Методом ПЦР был амплифицирован нужный участок ДНК, после чего его клонировали в экспрессионный вектор — так появилась рекомбинантная плазмида BSTpol. Далее последовали трансформация клеток E. coli и отбор положительных клонов, наличие вставки подтвердили рестрикционным анализом.
Следующими критически важными этапами стали экспрессия и очистка белка: именно они превращают генетическую конструкцию в рабочий препарат фермента. Сначала клетки E. coli заставили синтезировать целевой белок, а затем его выделили из клеточной массы и очистили от посторонних примесей.
В результате удалось получить препарат BST‑полимеразы, полностью пригодный для проведения LAMP‑реакций. Теперь лаборатория может самостоятельно нарабатывать этот фермент, строго контролировать его качество и при необходимости адаптировать или модифицировать под конкретные задачи. Собственная наработка фермента снизит зависимость от внешних поставок, а возможность доработки белка позволят точнее подстраивать методики под текущие исследовательские и диагностические цели.